毛細管電泳分析對進(jìn)樣技術(shù)有哪些要求?
更新時(shí)間:2021-05-17 點(diǎn)擊次數:1913
電泳儀:專(zhuān)為進(jìn)行電泳提供外加電場(chǎng)的直流電源,其輸出電壓或電流或功率要求相對穩定或按特定規律變化。常用的電泳分析方法主要有:醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳、毛細管電泳。其中,毛細管電泳分析對進(jìn)樣技術(shù)要求很高,進(jìn)樣操作事項如下:
1、進(jìn)樣區帶越小越好:
無(wú)論采用何種進(jìn)樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長(cháng)度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進(jìn)入毛細管而影響進(jìn)樣量的性。樣品管中溶液少為5μL,進(jìn)樣體積為1~50nL。2、進(jìn)樣時(shí)間以短為宜:
通常進(jìn)樣時(shí)間為0.5~1s,此時(shí)毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。 雖然毛細管電泳的進(jìn)樣時(shí)間可至±0.1s,但由于毛細管插入樣品管時(shí)不可避免地會(huì )粘附一些溶液,進(jìn)樣時(shí)間過(guò)短會(huì )影響分析的重復性。3、樣品預濃縮:
受毛細管內總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來(lái)提高檢測靈敏度,但可采取一些措施來(lái)改善。
* 當樣品緩沖液的電導明顯低于(100倍以上)電泳緩沖液時(shí),毛細管兩端加上電壓后可在樣品區帶前后形成一個(gè)更大的電場(chǎng),使樣品溶液中的分子遷移的更快。當這些分子到達電泳緩沖液邊界時(shí),由于電場(chǎng)減弱,遷移速度減慢,使樣品區帶由寬變窄,濃度提高,而達到濃縮的目的。 * 當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一樣,而樣品濃度較稀,不適合再作稀釋時(shí),可在進(jìn)樣前先吸入一些水,也能達到濃縮的目的。 無(wú)論采取何種進(jìn)樣方式,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區帶電勢陡降,會(huì )導致此區帶溫度升高。
4、毛細管插入樣品溶液后,應立即開(kāi)始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開(kāi)始電泳。否則會(huì )產(chǎn)生毛細作用和虹吸現象,引起誤差并使譜帶展寬。
5、電極不要和毛細管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡。
6、使系統盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進(jìn)樣量的恒定。
7、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強度應低于后者。
8、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。